La jugabilidad de Super Mario 3D Land es similar a la de los juegos de Mario en 3D anteriores, pero con algunas características innovadoras. El juego presenta una perspectiva en 3D, lo que permite a los jugadores ver a Mario y su entorno en un entorno tridimensional. Además, el juego incorpora elementos de los juegos de plataformas en 2D, como la capacidad de moverse en una sola dirección.